研究背景：学科对男性不育症的中医药治疗研究取得了一系列成果，中医药特色突出，对男性解脲脲原体(UU)感染性不育有独特的认识。本学科组认为UU感染性不育(精子活力低下)基本病机为肾阴亏虚，兼有湿热瘀滞。其病因多为房室不洁、房事不节或摄养失慎、湿热下注等。其病位在下焦，多以肾阴亏虚为本，湿热为标，病性属虚实夹杂之证，以虚为主。因而临床上，运用滋阴补肾、清热利湿、解毒化浊的知柏地黄丸为基本方治疗本病往往可取得满意临床疗效。临床上应用知柏地黄丸治疗UU感染性不育取得良好的疗效，为众多男性不育患者带来了福音，知柏地黄丸治疗UU感染性不育较抗生素有着明显优势，经治疗后，患者精子顶体酶、活率、活动力及正常形态并均有了明显的提高，患者配偶怀孕几率明显升高，可有效治疗UU感染性男性不育症。2014年以来，何清湖教授团队开始围绕"UU感染性不育"开展了一系列基础研究，并申请4项国家自然科学基金项目(UU感染对生精细胞线粒体通路的影响与知柏地黄丸的干预作用、基于线粒体通透性转化研究知柏地黄丸提高解脲脲原体感染大鼠精子活力的机制、基于"阴平阳秘"理论从Pink1/Parkin通路探讨UU感染性不育症的"线粒体自噬失衡"机制及知柏地黄丸的干预作用、UU感染对生精细胞线粒体结构与功能的影响以及知柏地黄丸干预作用的研究)，本学科研究表明这些细胞中的线粒体在某种意义上反应了中医"气"的作用，即气的物质属性可能是线粒体。前所述可知，UU感染性不育致精子活力低下的基本病机为肾阴亏虚，兼有湿热瘀滞，可知"气"病是其中的极其重要环节。阴成形，肾精亏虚，化气乏源，因而气不足，而致气病。气病可表现为相关线粒体的功能受损。因而通过监测线粒体功能的变化可以帮助我们判断出病势的转归。因此我们提出基于"阴平阳秘"理论，UU感染性不育症肾阴亏虚的可能微观基础是--生精细胞线粒体自噬失衡。本学科组通过知柏地黄丸对UU感染所致生精细胞线粒体能量代谢影响的研究，明确线粒体自噬在生精细胞线粒体能量代谢中的作用及UU感染性不育症生精细胞"线粒体自噬平衡"是"阴平阳秘"的微观基础。以此理论为指导，有助于深入理解知柏地黄丸通过滋补肾阴、清利湿热达到"阴平阳秘"，治疗UU感染性不育症的分子机制，将从全新角度阐释和丰富"阴平阳秘"理论内涵，并为临床确立"滋肾阴、平阴阳"的UU感染性不育症中医药治疗策略提供实验依据。
　　研究内容：
　　1.围绕名老中医临床经验，开展了基于临床科研对男性不育症的治疗经验临床观察与分析。
　　(1) 谭新华工作室无子(男性不育症)制定中医诊疗方案
　　①诊断方法参照《世界卫生组织男性不育标准化检查与诊疗手册》诊断疗效标准。②辨证论治：治疗男性不育症，首先要寻找发病原因，详辨虚实寒热、气血阴阳，然后采用辨证论治与辨病论治的方法，融合"病证"相参的治疗方法逐步摸索出其治疗规律。本病病变关键在肾，益肾补精是治疗本病的重要原则，治疗当注重调理肾之阴阳，补充肾之精气，疏导肾之精道。另外男性不育症的治疗切忌妄投寒凉或温热之品。因苦泄过度，一则败胃，引起胃脘疼痛，恶心呕吐;二则伤阳，导致性欲淡漠，阳痿不举，同时影响精子质量。③关于中成药：生精胶囊、复方玄驹胶囊、六味地黄丸。④单方验方：五子衍宗丸、聚精丸、黄鱼鳔胶。⑤ 针刺疗法选肾俞、关元、膀胱俞、三阴交等穴，毫针平补平泻。
　　(2)谭新华教授治疗精液不液化临证经验
　　谭老师认为精液不液化与痰、瘀、湿、虚均有密切联系, 根据"脾为生痰之源""脾主运化""久病多虚多瘀"理论指导下精巧用药, 在治疗上多采用健脾助运、活血祛瘀之品如麦芽、鸡内金、神曲、山楂、水蛭、地龙。现代研究表明鸡内金、麦芽、神曲、山楂等助脾胃化生之品, 可以调节全身酶的活性, 促进酶的分解作用, 有利于精液的液化;因此谭老师也将麦芽、鸡内金、神曲、山楂称之为"酶类"药物。在治疗精液不液化时谭老师谨察病机,分型论治,治病求本;在处方用药时辨病与辨证相结合, 补中有泻,补而不滞, 注重补而不留邪, 祛邪不伤正与阴中求阳、阳中求阴的阴阳调和的基本治疗原则, 酌情加以健脾利湿、活血祛瘀之"酶类"药物, 标本兼顾, 疗效显著。
　　(3)谭新华治疗男性不育症经验
　　谭教授认为:"种子之要, 贵在详查阴阳"、"治病不明阴阳, 动手即错"。男性不育症以阴阳偏衰者居多。治以滋阴降火为主, 方用大补阴丸合五子衍宗丸。此外, 对于男性不育症还需明察虚实、洞悉盛衰。正气虚者, 补之、固之、温之;邪实盛者, 攻之、清之、散之。虚实夹杂者, 攻补兼施而辨明主次, 虚中夹实者以扶正为主, 因实致虚者以攻邪为主。总之, 男性不育症当首辨阴阳虚实, 勿犯助火劫阴、虚虚实实之谬。谭教授认为男性不育症是一种病因复杂的男性疾病, 单用中医望闻问切的方法, 很难明确病因。在男性不育症的诊断过程中, 其常借助现代医学的理化检查。谭教授对于男性不育症的治疗, 以整体观念为指导, 通调五脏。
　　(4)贺菊乔教授治疗男性不育症用药经验的数据挖掘
　　贺教授认为精液精子异常的病因病机绝不是单一的"肾虚精弱"可以涵盖的，其病位可能是肝肾，也可能是脾胃;病损可能在精津，也可能在气血;治法可能是补益，也可能是清泻。拘于固法无异于圈于囹圄，审证度机，灵活应对方可收效满意。贺教授结合自己的临证经验执简驭繁，投以生精、通精和固精三大治法论治。生殖之精的发生发育依赖于气血充养和阴阳和合，治不离肝肾、脾胃;生殖之精的输送排出依靠于精窍精道的畅通无阻，治不离血瘀、湿浊。在生精的同时，辅之以收涩固精之药有助于促进生殖之精的长养成熟;在通精的同时，佐之以清热化湿之品有助于扫除精窍精道的热结瘀阻。"生"、"通"、"固"、"清"诸法相配，补中有泻，泻中有补，补泻结合，改填补为平补，使补而不滞、滋而不腻，切中病机，药证合拍，收效显著。数据挖掘的结果显示，贺教授治疗男性不育症以生精为主，固精、通精为辅。高支持度的药对亦充分体现了生精、固精、通精三法的交互应用。总之，贺教授治疗精液精子异常，用药上肝肾、阴阳并补;健运脾胃，充益气血，填先天以助后天，培后天以滋先天，从而达到生精养精的目的。贺教授亦善用成熟果实或种子类药物，"子"能生子，有"取象比类"之意。
　　(5)贺菊乔教授辨治男性不育经验
　　贺菊乔教授善于运用中医理论，攻克男性病疑难杂症，在长期的临床实践中，探索出各种治疗男性不育病的方法和途径，对男性不育病机有自己独特的看法：认为男性不育多因"肝肾亏虚"、"血瘀精滞"、"肝经湿热"、"情志失调"所致。故在治疗男性不育疾病过程中，贺教授也注重疏肝解郁。贺教授认为，精液的正常液化，有赖于阳气的气化，而阳气的气化，又依赖于阴阳的协调，因此一切可以引起机体阴阳平衡失调的原因或疾病因素均可导致精液不液化。贺教授在治疗男性不育症时，常采用益肾填精、滋补脾肾之法，其常用的生精汤。贺教授在治疗男性不育时也注重从肝论治。贺教授认为不育男子，皆为青壮年，肾气自当旺盛，如不放纵，肾虚者不多。然求子心切，肝气多有所郁，多为情志所伤，纵有肾虚，而肝郁居多，况且肝经与阴器关系密切，肝经"循阴股入毛中，过阴器抵少腹"，"肝者筋之合也，筋者聚于阴器，结于茎"，宗筋为肝所主，前阴为肝所统。肝之疏泄功能正常，精神情志调畅，性欲正常，阴茎勃起坚挺，房中性事才能正常。
　　2.基于"阴平阳秘"理论，围绕知柏地黄丸治疗UU感染性不育开展相关的基础研究
　　(1)知柏地黄汤对解脲脲原体感染模型精子线粒体能量代谢的实验研究
　　解脲脲原体是一种无细胞壁、结构简单，能在无生命培养基中生长繁殖的最小原核微生物，是男性生殖泌尿道感染的常见病原微生物。解脲脲原体感染主要通过损害和干扰睾丸的生精能力、降低精子生成数量和质量来影响男性生殖能力。经研究，知柏地黄汤干预后，解脲脲原体感染大鼠精子线粒体能量代谢得到明显改善，说明知柏地黄汤能通过调节解脲脲原体感染大鼠精子能量代谢，维护了大鼠精子线粒体正常的呼吸链耦联和细胞呼吸功能，提升精子的能量供给，抑制了线粒体凋亡因子的释放，从而使精子的密度、存活率及活力得以提高，这可能是知柏地黄汤治疗解脲脲原体感染性不育症的机制之一。
　　(2)知柏地黄汤对解脲脲原体感染模型精子线粒体呼吸链复合物的实验研究
　　线粒体是呼吸链电子传递和ATP产生的部位，95%的ATP由电子传递链上的氧化磷酸化反应产生，线粒体呼吸功能正常与否与精子运动能力直接相关。线粒体电子传递链是位于线粒体内膜的一个酶系，由线粒体呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ等组成。线粒体呼吸链复合物通过一系列的氧化还原过程最终形成ATP，为机体提供能量。如精子线粒体呼吸链复合物活性下降将导致ATP的生成障碍，精子的能量代谢障碍，精子活力下降，受精能力下降。知柏地黄汤干预后，大鼠精子浓度、精子活动率、a+b级精子百分率及线粒体呼吸链复合物活性均有上升，UU感染率明显下降。这与以本学科往研究发现精子活力与精子线粒体功能呈正相关性的结论是一致的。因此，我们认为抑制UU感染，增强线粒体能量代谢是知柏地黄汤治疗UU感染性不育的主要机制之一，我们在以后的研究中会进一步深入阐述。
　　(3)知柏地黄汤对UU感染大鼠生精细胞凋亡及相关凋亡因子表达的实验研究
　　随着分子生物学和循证医学的发展，越来越多的研究更倾向于UU感染导致生精细胞凋亡的关系，细胞凋亡主要是由于线粒体的变化引起的，因为线粒体对于细胞凋亡的传递有着非常重要的作用。其中的信号通路对于线粒体有很大的意义。凋亡刺激信号有很多种,启动时这些信号都会传递给线粒体;之后会对它进行分辨整理和考察,确认是否执行凋亡,一旦开始执行就必然导致细胞凋亡。临床以知柏地黄汤为主加减治疗因UU感染型精子活动力差,死精子多,成活率低,液化时间长等所致男性不育,收到了较好的效果。很多在半个月至一个月内精液常规指标基本转为正常。本实验研究表明，知柏地黄汤具有较好的抗UU感染作用，其抗UU作用与阿奇霉素相当,UU感染率与生精细胞凋亡率成正性相关,UU感染促使生精细胞的凋亡可能导致精液质量下降的原因之一。UU感染后伴随着两大凋亡途径核心因子的表达浓度显著增加，知柏地黄汤抗UU感染的同时能降低Caspase依赖途径的核心凋亡因子Cyt-c表达水平和下调Caspase非依赖途径关键效应因子AIF表达水平,使生精细胞凋亡减少,并提高精液质量。故凋亡因子Cyt-c、AIF表达的下降是知柏地黄汤治疗UU感染性不育症关键机制之一。
　　(4)知柏地黄丸对解脲支原体感染大鼠生精细胞线粒体膜电位及超微结构的实验研究
　　本学科早期研宄表明，弱精症男性存在精子尾内线粒体分布异常、排列紊乱、疏密不均，形态大小不一，且部分呈囊性扩张。在弱精症患者的精子中，线粒体存在诸多病变，包括线粒体排列松散，线粒体间隙增宽，线粒体缺损，线粒体肿胀，线粒体脊消失，线粒体空泡化，线粒体囊性化，畸形、巨形或不规则形线粒体，线粒体脱鞘，相邻线粒体膜融合，线粒体脊分布紊乱，膜间隙部分或全部消失。同样在特发性弱精子症患者也发现存在多种线粒体结构异常表现，如线粒体缺损、小线粒体、大线粒体、线粒体排列紊乱、线粒体粘连、融合、堆积、线粒体嵴模糊，线粒体囊性化。在少弱精子症大鼠动物模型中，同样观察到精子线粒体大小不一、结构肿胀、线粒体膜不完整，轴丝断裂或结构不清等异常。在本研宄中发现UU感染模型组大鼠A级精子、B级精子、直线速度、平均速度以及生精细胞线粒体膜电位水平均明显低于正常组，同时线粒体超微结构也遭到损伤。经治疗后，中药组A级精子、B级精子、直线速度、曲线速度、平均速度水平以及生精细胞线粒体膜电位水平均提高，同时线粒体损伤也得到改善。
　　(5)知柏地黄汤对解脲脲原体感染模型大鼠精子线粒体通透性转化的实验研究
　　横跨线粒体内外膜之间的非选择性高导电性通道是线粒体通透性转化(mPTP)由多种蛋白质复合组成。mPTP是线粒体内外信息交流的枢纽，mPTP的开放在线粒体调控细胞凋亡中起到重要的作用，与线粒体的功能障碍密切相关。mPTP由外膜的VDAC、内膜的ANT、线粒体基质中的CyP-D等组成。mPTP的正常开放依赖于其结构的完整性—VDAC及ANT表达正常。mPTP开放导致线粒体基质内呈高渗状态，导致线粒体内外H+梯度消失，呼吸链脱偶联，线粒体氧化磷酸化活性降低、ATP合成减少、线粒体功能发生障碍;本研究结果显示:UU感染大鼠精子线粒体VDAC2、ANT4蛋白表达水平下降，VDAC2mRNA、ANT4mRNA表达水平降低，ATP、ATP/ADP及EC值下降。经知柏地黄汤干预后，UU感染大鼠精子线粒体VDAC2、ANT4蛋白表达水平上升，VDAC2mRNA、ANT4mRNA表达水平升高，ATP、ATP/ADP及EC值上升。其中知柏地黄汤组改善明显。上述研究结果说明UU感染损伤下的精子细胞会出现VDAC2、ANT4蛋白及基因表达水平降低，ANT/VDAC的转运异常，导致线粒体基质内呈高渗状态，导致线粒体内外H+梯度消失，呼吸链脱偶联，线粒体氧化磷酸化活性降低、ATP、ATP/ADP及EC值下降、线粒体能量代谢发生障碍，精子供能不足，最终导致UU感染大鼠精子活力下降因此，我们认为通过改善大鼠生精细胞线粒体通透性转化，增强大鼠生精细胞线粒体能量代谢，是知柏地黄汤治疗UU感染性不育症的机制之一。
　　研究成绩：1.基于名老中医多年的临床经验研究与观察，能有效指导男性不育症患者的临床辨证论治，提高临床疗效。2.从微观角度对知柏地黄丸治疗UU感染性不育的治疗从提供了实验依据。3.建设期内研制院内制剂前炎清片、前癃痛胶囊和尿癃康丸等共计4种制剂，治疗范围涵盖了前列腺疾病。2013年-2018年自制药年销售量居院内制剂销售药物前列，取得了较好的经济效益。4.研究成果已通过国家基地重点病种、重点专科以及学术会议、专家讲座等方式全国范围内推广，进一步提高中医临床疗效。
　　承担课题及科研成果奖项：近5年来，该方向承担科研项目共计 8项，其中国家自然科学基金4项，省部级1项，厅局级3项，发表论文33篇。

科研课题
课题名称		课题来源			时间		状态
二仙汤及其拆方对肾阳虚证大鼠附睾精子成熟微环境相关因素影响的研究		湖南省科技厅项目			2012．1-2013.12		已完成
滋阴补肾颗粒预防解脲脲原体感染所致男性不育症的药效学实验研究		长沙市科技计划项目			2013.1-2014.12		已完成
UU感染对生精细胞线粒体结构与功能的影响以及知柏地黄丸干预作用		国家自然科学基金			2014.1-2017.12		已完成
基于"HGF 是乙癸同源物质基础"假说的"肾肝同治"法干预男性更年期综合征机制研究		国家自然科学基金			2013．1-2015．12		已完成
"基于"天癸竭"理论探讨LOH发病的"氧化应激-自噬失调"机制及雄蚕益肾方干预研究		国家自然科学基金			2017.1-2020.12		进行中
基于"天癸竭"理论探讨LOH发病的"氧化应激-自噬失调"机制及雄蚕益肾方干预		湖南省教育厅优秀青年项目			2017.1-2019.12		进行中
基于PINK1/Parkin通路探讨雄蚕益肾方干预LOH的"氧化应激-自噬"机制		湖南省自然基金			2018.1-2020.12		进行中
基于"阴平阳秘"理论从PINK1/Parkin通路探讨UU感染性		国家自然科学基金			2018.1-2021.12		进行中
科研成果
获奖成果名称	授予单位		授予时间	奖励名称		等级
《湖湘中医文化》	中华中医药学会		2015.12	中华中医药学会学术著作奖		三等奖
雄蚕益肾方对迟发性性腺功能减退症大鼠睾丸组织超微结构影响	中国中西医结合学会男科专业委员		2016.9	中国中西医结合学会男科专业委员会第三届"吉祥杯"优秀论文比赛		一等奖
重度弱精子症的治疗再思考	中华中医药学会男科分会		2017.11	中华中医药学会男科分会青年医师演讲比赛		二等奖
《马王堆古汉养生大讲堂》	中华中医药学会		2018.9	科技进步奖		二等奖
《专科专病特色方药丛书》	中华中医药学会		2011.1.17	中华中医药学会学术著作奖		一等奖
《马王堆古汉养生大讲堂》（第2版）	中共湖南省委宣传部		2011.5.3	2011年湖南省优秀科普奖		科普奖